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流式檢測細胞內鈣離子濃度實驗

流式檢測細胞內鈣離子濃度實驗

簡要描述:
流式檢測細胞內鈣離子濃度實驗:流式細胞術測量鈣離子的熒光探針大都是鈣螯合劑EDTA的衍生物,有較高的量子產量,并對鈣有較高的特異性親合力。鈣離子流式熒光探針本身不能透過細胞質膜進入細胞內,將它們連潔乙酰甲酯后,可將染料導入細胞,經細胞內的非特異性酯酶水解水解該酯鍵,釋放出染料分子,恢復為不能通過細胞膜的游離酸形式,進而與細胞內鈣結合。通過熒光強度可以敏感地檢測出鈣離子濃度。

更新時間:2024-07-26

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廠商性質:其他

1.Fluo/Am儲存液配制:將Fluo/Am溶于DMSO,配成終濃度為2mmol/L的儲存液,分裝,-70度凍存。

2.懸浮細胞染色:收集細胞并調整細胞濃度至2*10^6個/ml,加Fluo/Am至終濃度為5-10umol/L,置于,5%CO2。37度避光,孵育30-60min,其間輕輕振蕩幾次,并設置陰性對照(不加Fluo/Am)。

3.貼壁細胞染色:以5*10^5個細胞種植于24孔培養板中,置于5%CO2。37度培養一段時間,加入Fluo/Am至終濃度為5-10umol/L,置于5%CO2。37度避光,孵育30-60min。其間輕輕振蕩幾次,并設置陰性對照。

4.取出細胞或消化細胞,離心1500r/min 10min,去除多余染料,再用無鈣緩沖液沖洗PBS反復離心洗滌2次,最后用無鈣PBS重懸至0.5ml。



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